在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）与铜离子（Cu2+）作用，形成紫红色络合物（该物质的分子结构式见图），该反应即双缩脲反应。

铜溶液作用，就会形成紫色或蓝紫色络合物。

注：除-CO-NH-有此反应外，酰胺基（-CO-NH2）、亚甲基（-CH2-）、亚氨基（-NH-）、（-CS-CS-NH2）等基团亦有此反应。值得注意的是，发生双缩脲反应，一般需要含有两个或两个以上的肽键（-CO-NH-），或与它类似的结构，二肽不能发生双缩脲反应。例如，甘氨酰甘氨酰甘氨酸（Gly-Gly-Gly，一种三肽，含有两个肽键）和双缩脲（biuret）结构相似，可以发生（positive response）双缩脲反应；而甘氨酰甘氨酸（Gly-Gly，一种二肽，含有一个肽键），不能发生（negative response）双缩脲反应（图1）。